【产品描述】
本培养基含有人肝实质细胞体外培养所需的所有营养成分，无需其他添加剂，无血清，无生长因子，无细胞因子。能够支持新鲜或冻存的人原代肝细胞长达三个月以上的培养，且维持肝细胞典型多角型形态，尤其是能够维持关键功能基因和极性蛋白基因如：ASGR1，ABCC2，ABCB11，ABCB4，CYP3A4和SLC10A1等的表达水平，保持细胞糖原存储能力、ICG吸收释放能力，因此培养的细胞可用于研究肝细胞代谢、转运和病毒感染过程。同时，经过测试发现，本添加剂能够维持人肝细胞代谢脂肪酸的能力，维持细胞关键CYP酶活性和微胆管结构，因此培养的细胞也可用于建立肝细胞慢性肝炎模型、长期肝毒性刺激模型和胆汁分泌抑制模型等，从而可模拟肝病和肝毒性的发生过程及开展肝细胞对药物反应的研究。
【适用范围】
本产品作为原代人肝细胞培养基，既可用于新鲜分离的人肝细胞，也适用于冻存后复苏的人肝细胞，能够维持肝细胞的自我更新能力，使原代细胞扩增2-3倍，并在长达三个月的培养中维持人原代肝细胞的形态、关键基因表达、分泌、代谢和CYP酶活功能。
【注】本产品不支持小鼠肝细胞的长期培养。
【培养基组成】 添加剂 规格 10 mL 基础培养基 规格 500 mL 添加剂使用比例1：50
【保存条件】 添加剂：-20℃ 基础培养基：4℃ 有效期：一年 。
【使用方法】
（1）将10 mL添加剂与500 mL基础培养基混匀后即可使用，日常4℃保存（1-2个月内使用完毕），使用前预热至37℃。
（2）细胞铺板前一天，使用康宁Rat Tail Collagen I对细胞培养皿进行包被，4℃过夜。
（3）回收胶原，使用PBS清洗3遍培养皿。
（4）将冻存人原代肝细胞或新鲜分离的人肝细胞种板至胶原包被的细胞培养板（96/24/12/6孔板）中（注：复苏、铺板培养基可搭配 Xenotech 的 K8000 及 K8200使用，或其他复苏、铺板培养基）。种板密度应为1×105-3×105/cm2，在37℃，5% CO2培养箱中进行培养。6小时后细胞完全贴壁，轻轻吸掉种板所用的培养基，更换为本培养基后放回原培养箱继续进行培养。
（5）每三天更换一次细胞培养基，第18天左右细胞生长达到稳定时期，细胞形态饱满，呈现清晰的典型人肝细胞多角型形态，取细胞进行计数、免疫荧光染色和RT-qPCR鉴定，用于开展肝脏体外模型的建立或加药测试等。
【相关结果参考】
注：实验数据为使用新型人原代肝细胞体外长期培养套装
【注意事项】
1．实验操作应严格按照说明书进行。
2．原代人肝细胞的分离和复苏过程及所使用的试剂需参考相关文献报道及细胞供应商。
